人磷脂酰肌醇抗體IgG;IgM（PI Ab-IgG;IgM）檢測(cè)試劑盒

2022年01月05日 13:58上海科順生物科技有限公司點(diǎn)擊量：368

本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷

人磷脂酰肌醇抗體IgG;IgM（PI Ab-IgG;IgM）ELISA檢測(cè)試劑盒

使用說明書

檢測(cè)原理

試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被人磷脂酰肌醇抗體IgG;IgM(PI Ab-IgG;IgM)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、樣本、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人磷脂酰肌醇抗體IgG;IgM(PI Ab-IgG;IgM)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值)，判斷樣品是否含有人磷脂酰肌醇抗體IgG;IgM(PI Ab-IgG;IgM)。

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標(biāo)儀(450nm)

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項(xiàng)

1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。

2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封(低溫干燥)保存。

3. 預(yù)處理后的樣本無需稀釋，直接取10μL加樣即可。

4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5. 所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱	96孔配置	48孔配置	備注
微孔酶標(biāo)板	96孔	48孔	無
陰性對(duì)照	0.3mL	0.3mL	無
陽(yáng)性對(duì)照	0.3mL	0.3mL	無
樣本稀釋液	6mL	3mL	無
檢測(cè)抗體-HRP	10mL	5mL	無
20×洗滌緩沖液	25mL	15mL	按說明書進(jìn)行稀釋
底物A	6mL	3mL	無
底物B	6mL	3mL	無
終止液	6mL	3mL	無
封板膜	2張	2張	無
說明書	1份	1份	無
自封袋	1個(gè)	1個(gè)	無

試劑的準(zhǔn)備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2. 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟

1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔，陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各50μL；

3. 待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；

4. 隨后陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

結(jié)果判斷

1. 試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00；

陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15。

2. 臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

3. 陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

4. 陽(yáng)性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽(yáng)性

試劑盒性能

1. 準(zhǔn)確性：陽(yáng)性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00；陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15，說明試驗(yàn)結(jié)果有效。

2. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

4. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

5. 有效期：6個(gè)月

免責(zé)聲明

1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。

2. 嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。

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